Sunitinib'e Maruz Bırakılmış Mezenkimal Kök Hücreler Üzerinde Oksitosin Etkisinin İncelenmesi
Proje no. 21772 · Durum: Kapanmış · 2020
Özet
Mezenkimal kök hücreler deneysel ve klinik çalışmalarda kullanılan önemli tedavi yöntemleridir. Günümüzde mezenkimal kök hücre tedavisi birçok hastalıkta uygulanmaktadır. Organ nakillerinden sonra kullanılan immünsupresif ilaç tedavisinin yanı sıra hastalarda mezenkimal kök hücre uygulaması da yapılmaktadır. Yapılan bu deneysel çalışmada organ nakillerinde immünsupresif amaçla kullanılan sunitinibin sıçan adipoz doku kaynaklı mezenkimal kök hücreler üzerindeki sitotoksik etkilerinin araştırılması ve antioksidant özelliği olduğu bilinen oksitosinin bu toksisite üzerindeki etkileri gözlemlenmiştir. Adipoz doku kaynaklı mezenkimal kök hücreler hattı ticari olarak temin edilmiştir. Yapılacak çalışmaların gerektirdiği doğrultuda, mezenkimal kök hücreler yeterli sayıya ulaşana kadar özel besiyeri içerisinde 37oC’de inkübe edilmiştir. Etken maddelerin sitotoksik etkileri WST-1 testi ile zaman ve doz bağımlı olarak değerlendirilmiştir. Canlılık ve proliferasyon analizleri ışık mikroskobu kullanılarak ve hücre sayımı yapılarak belirlenmiştir. BD Accuri C6 flow sitometri cihazı kullanılarak apoptoz ve hücre canlılığı değerlendirmeleri yapılmıştır. Biyokimyasal yöntemlerle lipit peroksidasyonu, glutatyon peroksidaz (GPx), katalaz (CAT) aktivitesi ve superoksit dismutaz (SOD) aktivitesi ölçülmüştür. Gruplara uygulanan ajanların sitotoksik dozları WST-1 testi ile değerlendirilmiştir. Anneksin V yöntemi ile nekrotik, erken apoptotik, geç apoptotik, toplam apoptotik ve canlı hücreler hem yüzde olarak hem de hücre/ml olarak hesaplanmıştır. Oksidatif stresle oluşan ve reaktif oksijen metabolitlerinin verdiği zararı belirlemek amacıyla lipit peroksidasyonu, glutatyon peroksidaz (GPx), katalaz (CAT) aktivitesi ve superoksit dismutaz (SOD) aktivitesi ölçülmüştür. Sıçan adipoz doku kaynaklı mezenkimal kök hücreler için Sunitinib IC50 dozu (48. saat) için 44, 57 µM olarak hesaplanmıştır. Oksitosin için ise çalışılan dozlarda sitotoksik etki gözlemlenmemiştir. Bu yüzden en yüksek sabit doz olan 100 µM ile çalışmaya devam edilmiştir. BD Accuri C6 flow sitometri cihazı ile yapılan ölçümler ve yapılan hesaplamalar doğrultusunda kontrol grubundaki hücrelerde ölü hücre yüzdesi 1,03; canlı hücre yüzdesi 98,97 olarak hesaplanmıştır. Oksitosin grubundaki hücrelerde ölü hücre yüzdesi 2,59, canlı hücre yüzdesi 97,41 olarak hesaplanmıştır. Sunitinib grubunda erken apoptoz oranı %7,69; geç apoptoz oranı %4,31; ölü hücre %8,10; canlı hücre %79,90 olarak hesaplanmıştır. Sunitinib+Oksitosin kombine grup sonuçlarında ise erken apoptoz oranı %3,90; geç apoptoz oranı %1,34; ölü hücreler %7,81; canlı hücreler %25,5 olarak ölçülmüştür. Biyokimyasal bulgular ise MDA düzeylerinde Kontrol grubu, GSH-Px düzeyleri açısından Sunitinib grubu, CAT düzeyleri açısından oksitosin grubunda değişiklik olmadığı için güven aralıkları diğer gruplara göre hesaplandı, SOD düzeyleri bakımından ise kontrol ile diğer üç grup arasında farklar anlamlı bulunurken, diğer gruplar arasında hiçbir ikili farklılık anlamlı bulunmadı. Tüm gruplar arası ikili farkların tümü istatistiksel olarak anlamlı olarak saptanmıştır (p<0.001). Çalışmada, literatür taraması sonucunda sunitinibin mezenkimal kök hücrelerde üzerinde apoptozu arttırması beklenmektedir. Oksitosinin hücre proliferasyonu düzenlediğini gösteren bulgular bulunmaktadır ancak, Oksitosinin antiapoptotik etkileri bu çalışmanın kombine grupta oksitosinin sunitinib etkisini baskılayamadığı görülmüştür.