Glioblastoma hücrelerinde mTORC1/2’nin dual hedeflenmesinin global metilasyon ve histon modifikasyonları üzerinde yarattığı değişikliklerin incelenmesi
Proje no. 24000 · Durum: Kapanmış (Yayın bekleniyor) · 2023
Özet
<p>Bugüne kadar yapılan çalışmalarda, PI3K/Akt/mTOR yolağının Glioblastoma’nın %88’inde overeksprese olduğu gösterilmiştir. mTOR yolağı ve serin-treonin metabolizması arasındaki yakın ilişkinin, metilasyon ve mTOR yolağı ile korelasyona dikkat çekmesi ile başlayan bu süreç, son üç yıldan beri yapılan araştırmalarda mTOR'un doğrudan ve dolaylı olarak hem DNA metilasyonunu hem de histon modifikasyonlarını etkileyebileceği yönünde devam etmiştir. Palomid 529, yeni nesil bir dual mTOR inhibitörü olması ve aynı zamanda kan beyin bariyerinden yüksek oranda geçmesi sebebiyle GBM için uygunluğu dikkat çeken bir farmakolojik ajandır. U87-mg hücrelerinde anjiyogenezi ve tümör büyümesini inhibe ettiği ayrıca kan beyin bariyerini ABCB1 and ABCG2 kasetlerinin kısıtlaması olmadan geçtiği belirlenmiş fakat altında yatan mekanizmalar açığa çıkarılmamıştır.</p><p>Bu çalışmada ise öncelikle GBM modeli olan U87-mg ve T98G hücrelerinde mTORC1 ve mTORC2’nin düzenlediği epigenetik mekanizmaların ortaya çıkarılması ve Palomid 529’un antikanser aktivitesinin DNA metilasyon değişiklikleri ve histon modifikasyonu ile olan ilişkisinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır.</p><p>Buna istinaden öncelikle U87-mg ve T98G hücreleri üzerinde Palomid 529’un sitotoksik etkisi WST-8 ile değerlendirilecek, sonrasında ise apoptotik etkisi Annexin ve JC-1 metodları ile incelenecektir. MTOR inhibitörü uygulanmadan önce ve uygulandıktan sonra izole edilen DNA örneklerinden global gen metilasyonu analizi yapılacaktır. Histon modifikasyonları ise histon ektraksiyonu sonrasında protein miktar tayini için bradford testi yapılarak devamında antikor tabanlı histon modifikasyon analizi mikroplak okuyucuda gerçekleştirilecektir. Global metilasyon sonucunda en çok metilasyon değişikliği görülen 16 genin ekspresyonu qRT-PCR yöntemi kullanılarak saptanacaktır.</p><p>Bu çalışma, glioblastoma tedavisinde mTOR inhibitörlerinin kullanımının metilasyona etkisini araştıran ilk çalışma olması nedeniyle, çıktıları ile daha spesifik hedefler üzerine yoğunlaşmayı, <em>in vivo</em> çalışmalar için zemin oluşturmayı ve literatüre katkı sağlamayı planlamaktayız.</p>