Toxoplasma gondiinin her üç dönemine etkili DNA ve rekombinant protein aşı stratejisinin geliştirilmesi
Proje no. 22890 · Durum: Kapanmış · 2021
Özet
Toxoplasma gondii, hemen hemen her sıcakkanlı hayvanı, kuş türlerini ve insanları enfekte edebilen zorunlu hücre içi parazitidir. Toksoplazmoz, immun sistemi sağlam kişilerde asemptomatik ilerlerken, immun sistemi baskılanmış ya da immun yetmezliği olan kişilerde şiddetli enfeksiyona neden olabilmektedir. T. gondii’nin insanda görülen üç dönemine de etkili tam koruyucu bir aşı henüz geliştirilmemiştir. Çalışma grubumuz 2018 yılında protein microarray tarama yöntemi ile T. gondii’ye ait 2870’ten fazla ekzon ürünü rekombinant protein olarak eksprese etmiş ve sonrasında hasta fare ve insan serumları ile karşılaştırılarak immun yanıt oluşturmuş 240 antijenik proteini belirlemiştir.<br /> Bu projede parazitin üç döneminde de yüksek immünojen olduğu daha önceki tarama çalışmalarımızda gösterilmiş SRS13, SRS29A, MIC12 ve ROP6 proteinleri aşı adayı olarak seçilmiştir. Proje kapsamında SRS13, SRS29A, MIC12 ve ROP6 proteinleri in siliko olarak analizi yapıldıktan sonra pVAX1 aşı vektörüne klonlanarak DNA aşıları oluşturulacak ve rekombinant protein eksprese etme kapasiteleri HEK293 hücrelerde in vitro transfeksiyon ile belirlenecektir.<br /> Rekombinant protein aşılarının geliştirilmesi için SRS13, SR29A, MIC12 ve ROP6 genleri mayada ekspresyon gerçekleştirebilen pYES2.1/V5-His-TOPO vektörüne klonlanacaktır. Hedef genleri içeren vektörler maya hücresine transforme edilecek, sıvı kültürlerde üretilecek ve ardından saflaştırılacaktır. Her iki hücrede eksprese olan proteinler Western blot ve IFAT ile gösterilecektir.<br /> SRS13, SR29A, MIC12 ve ROP6 genleri içinde en iyi eksprese olan rekombinant proteinler lipozomla aşı formülasyonları oluşturulacaktır. DNA aşıları ve lipozomla birleştirilen rekombinant protein aşıları Balb/c farelere 2 haftada bir, toplam 3 kez uygulanacaktır. ELISA, Western blot ve akış sitometrisi yöntemleri kullanılarak aşılama ile uyarılan immun yanıt belirlenecektir. Aşıların koruyucu etkisi farelere oral yoldan T. gondii PRU suşunun uygulanması ile belirlenecektir.