KİSTİK EKİNOKOKKOZİSLİ HASTALARDA DOLAŞIMDAKİ miRNA (let7 miR71 ve miR10) LARIN KİST EVRELERİNE GÖRE ARAŞTIRILMASI
Proje no. 20565 · Durum: Kapanmış (Yayın bekleniyor) · 2019
Özet
Kistik ekinokokkozis (KE), Echinococcus granulosus’ un larval formunun başta karaciğer olmak üzere çeşitli organlarda kistler oluşturduğu paraziter bir hastalıktır. Dünya Sağlık Örgütü (DSÖ), kist tiplerini CE1’den CE5’e kadar sınıflandırmıştır. Bu sınıflandırma kistin aktifliği ve hastanın takibi açısından önemlidir. MikroRNA (miRNA)’lar, translasyonu inhibe ederek veya transkripsiyonu manipüle ederek ekspresyonunu düzenleyen 18-22 nükleotid uzunluğunda RNA’lardır. Yapılan çalışmalarda miRNA’ların serum ve plazmada stabil olarak bulundukları gösterilmiştir. Çalışmamızda literatür araştırmalarına göre E.granulosus’da daha önce saptanmış miRNA’lardan 3’ünün (egr-let-7, egr-miR-71 ve egr-miR-10), KE’li hastaların kan örneklerinde araştırılması ve kist tiplerine göre karşılaştırılması amaçlanmıştır. KE tanısı almış, kist sınıflandırması yapılmış hastalardan (n:50) ve sağlıklı gönüllülerden (n:20) alınan kan örnekleri ELISA ve Western Blot (WB) yöntemleri ile değerlendirilmiştir. Daha sonra miRNA analizi için, plazmalarından Kantitatif Real Time PCR (qRT-PCR) yöntemi ile hedef 3 miRNA’nın değerlendirmesi gerçekleştirilmiştir. miRNA ekspresyon seviyeleri, 2 -??CT yöntemine göre hesaplanarak kist sınıflandırmalarına göre karşılaştırılmıştır. Hastaların 31’i (%62) kadın, 19’u (%38) erkek olup yaşları 8-73 arasında değişmektedir. ELISA sonuçlarına göre 41 (%82) örnek pozitif tespit edilmiş, iki (%4) örnek eşik değerde, 7 (%14) örnek negatif olarak bulunmuştur. WB yöntemiyle hasta grubu örneklerinde KE spesifik bantlar tespit edilmiştir. Sağlıklı kontrol grubu örnekleri ELISA ve WB yöntemiyle KE açısından negatif tespit edilmiştir. Hasta örneklerinde egr-let-7, egr-miR-10 ve egr-miR-71 için sırasıyla 27 (%54), 5 (%10) ve 13 (%26)’ünde amplifikasyon tespit edilmiştir. Sağlıklı kontrol grubunda herhangi bir amplifikasyon tespit edilmemiştir. miRNA ekspresyon seviyelerinde hasta grubunun ekspresyon seviyesi sağlıklı kontrollere göre anlamlı şekilde farklı bulunmuştur (p<0,05). Kist sınıflandırmalarına göre ise CE1’de egr-miR-71 ve CE2’de egr-let-7’de istatistiksel olarak anlamlı fark tespit edilmiştir (p<0,05). Sonuç olarak; çalışmamızda KE’li hastaların plazma örneklerinde E.granulosus kaynaklı miRNA’ların tespit edilebildiği gösterilmiştir. Kist sınıflandırmalarına göre, CE1’de egr-miR-71 ve CE2’de egr-let-7 KE’nin erken tanısı ve takibi açısından kullanılması umut vericidir. Bu çalışmamız bugüne kadar KE’li hastaların kan örneklerinde miRNA’ların tespitine yönelik Türkiye’de yapılmış ilk çalışmadır.