TİROZİN KİNAZ VE MTOR/PI3K DUAL İNHİBİTÖRLERİNİN KRONİK MİYELOİD LÖSEMİDE TRANSKRİPSİYON REGÜLASYONU ÜZERİNDEKİ ETKİLERİ.
Proje no. 6 · Durum: Kapanmış · 2015
Özet
Kronik miyeloid lösemi (KML), BCR-ABL1 füzyon proteinine sahip hücrelerle karakterize miyeloproliferatif bir hastalıktır. Tirozin kinaz inhibitörü (TKI) ponatinib, T315I dahil olmak üzere birçok BCR-ABL1 otofosforilasyonunu inhibe edebilmektedir. TKI’ler, aktif alternatif sağkalım yolaklarının baskılayamadıkları ve lösemi kök hücreleri üzerinde etkili olmadıklarından tedavinin etkinliği düşebilmektedir. TKI tedavisinin başarısının düşük olduğu KML olgularında çoklu-hedefli tedavi yaklaşımlarına ihtiyaç vardır. KML’de aktif olduğu bilinen PI3K/Akt/mTOR yolağının inhibitörlerinden VS- 5584, tercihen kanser kök hücrelerini öldüren, potent dual inhibitördür. Çalışmada, VS-5584 ve ponatinib ile eş zamanlı BCR-ABL1 PI3K/mTOR inhibisyonunun KML tedavisinde oluşturduğu moleküler süreçlerin aydınlatılması hedeflenmiştir. KML hücre modeli K562, lösemi kök hücre modeli LSC ve normal hematopoietik kök hücre modeli HSC hücre hatlarında, VS-5584’ün, ponatinibin ve kombinasyonlarının sitotoksik etkileri WST-8 ile belirlendi. Kombinasyon indeksleri CalcuSyn izobologram analiziyle değerlendirildi. Belirlenen dozların apoptotik etkileri Anneksin-V ve aktif kaspaz-3 analizleriyle hücre döngüsüne etkileri PI analiziyle akım sitometride değerlendirildi. Transkripsiyon faktörlerinin aktivelerindeki değişimler uygun vektörlerin transfeksiyonu sonrasında dual-lusiferaz aktivitesiyle kantite edildi. Hedef genlerin mRNA seviyelerindeki değişimleri saptamak için qRT-PCR gerçekleştirildi. K562 ve LSC hücrelerinde ED50 additif, ED75 sinerjistik olarak belirlendi. Ponatinibin indüklediği apoptoza ek olarak, VS-5584’ün hücre döngüsünde belirgin G 0/G1 duraklamasına neden olduğu gösterildi. Lösemi hücrelerine kombinasyon uygulamasıyla; Elk-1/SRF, AP-1, NFkB, Myc/Max, CREB, STAT3 ve E2F/DP1 aktivitelerinde baskılanma, C/EBP aktivitesinde artış gözlendi. Ekspresyonları bu transkripsiyon faktörleri tarafından kontrol edilen genlerin mRNA seviyelerinin değiştiği belirlendi. Sonuçlar, ponatinib ve VS-5584 ile sağkalım yolaklarında görevli transkripsiyon faktörlerinin regülasyonlarının anti-proliferatif ve apoptotik süreçlere katkı sağladığını gösterdi. Ponatinib ile VS-5584’ün kombinasyonunun, KML hücrelerdeki alternatif sağkalım yolaklarını selektif olarak önleyebilecek umut verici bir tedavi stratejisi olabileceğini düşünmekteyiz.