5-alfa redüktaz enzimi nakavtına yönelik CRISPR/Cas9 enzim immobilizasyonu sağlayan lipozom formülasyonlarının geliştirilmesi ve etkinliğinin değerlendirilmesi
Proje no. 22487 · Durum: Kapanmış · 2021
Özet
Proje önerisinde yenilikçi bir gen düzenleme aracı olan CRISPR teknolojisi kullanılarak prostat kanserine ve/veya prostat hiperplazisi tedavisine yönelik 5-alfa reduktaz enzim nakavtı amaçlanmaktadır.<br /> Bu kapsamda CRISPR-ilişkili nükleaz-9 (Cas9) enziminin immobilizasyonu ve 5-alfa reduktaz enzim nakavtına yönelik kılavuz RNA (sgRNA) ile hücre içi integrasyonu sağlayabilen taşıyıcı bir sistem geliştirilmesi amaçlanmıştır. Mevcut uygulanan CRISPR temelli yaklaşımlardan farklı olarak Cas9 enzimini enkapsüle edebilen ve dış yüzeyinde sgRNA’lar ile kompleks oluşturabilen lipozom temelli bir taşıyıcı sistem geliştirilecektir. Geliştirilen lipozomların karakterizasyon çalışmaları kapsamında DLS yöntemi ile partikül boyutu, zeta potasiyeli ve polidispersite indeksi değerlerinin ölçülmesi; agaroz jel elektroforezinde SDS salım ve serum stabilitelerinin belirlenmesi; taramalı elektron mikroskopisi ile partikül morfolojisinin belirlenmesi; lipozomların enkapsülasyon oranlarının ve Cas9 enzimi salım profillerinin belirlenmesi; son olarak da partiküllerin stabilitesinin 3 ay süreyle takip edilmesi planlanmıştır. Karakterizasyon çalışmaları sonrasında lipozomların sitotoksisite çalışmaları ile güvenli uygulama dozları belirlenecek ve transfeksiyon etkinliğinin kalitatif ve kantitatif analizi gerçekleştirilecektir. Son olarak geliştirilen sistemin 5-alfa redüktaz enzimi gen nakavtı derecesi mRNA ve protein düzeyinde belirlenecektir.<br /> Prostat hücre hatlarında yapılacak bu çalışma ile prostat hiperplazisi, prostat kanseri, androjenik allopesi ve steroid metabolizmasındaki önemli rollere sahip 5 alfa redüktaz enzimine yönelik mevcut inhibitörlere alternatif olabilecek kalıcı gen düzenlemesi yapabilen bir tedavi yaklaşımı geliştirilecektir. Geliştirilmek istenen bu konsept ile tekrar doz uygulaması gerektirmeyen ve yan etkileri düşük bir formülasyon arayışı çalışmalarına yenilikçi bir çözüm yaklaşımı sunulacaktır.