NÖROBLASTOMA KANSER HÜCRE HATLARINDA ROTTLERİN VE GENİSTEİN’İN HÜCRE PROLİFERASYONU, İNVAZYONU VE HÜCRE ÖLÜMÜ/SİKLUSU ÜZERİNE ETKİLERİ.
Proje no. 24 · Durum: Kapanmış · 2016
Özet
Giriş ve Amaç: Nöroblastoma (NB) tüm dünyada çocukluk döneminin en yaygın kanseri olmakla beraber yine çocukluk çağındaki en sık karşılaşılan ekstrakraniyal solid kanserlerden birisidir. Tirozin kinaz sinyalizasyonu nöroblastoma da hücre farklılaşmasında temel bir role sahiptir. Mallotus philipinensis’ten (Euphorbiaceae) köken alan doğal polifenolik bir bileşik olan Rottlerin’in proliferasyon ve apoptoz gibi çeşitli hücresel prosesler üzerine olan etkilerinden dolayı kanser tedavisi için büyük bir potansiyele sahip olduğu görülmektedir. Genistein bir fitoöstrojen olup, tirozin kinaz inhibitörü olarak işlev görebilmektedir. Genistein’in büyük olasılıkla prostat, serviks, beyin ve meme gibi çeşitli kanserlerde hücre bölünmesi ve sağ kalımını inhibe etmesi yoluyla kontrolsüz kanser büyüme ve gelişimini inhibe ettiği tespit edilmiştir. Son yıllarda, atipik bir kinaz olan Ökaryotik elongasyon faktörü-2 kinaz’ın (EF2K) birçok kanser hücresinde dramatik bir biçimde upregüle olduğu ve hücre sağ kalımı ile proliferasyonu tetiklediği, ayrıca inhibisyonunun hücre büyümesi ve koloni formasyonunu önemli düzeyde azalttığı öğrenilmiştir. Rottlerin ve Genistein pankreas kanseri gibi diğer solid tümörlerde de bu kinaz üzerine inhibitörik etkiler göstermiştir. Ancak, Rottlerin ve Genistein’in bu kanserdeki etki ve rolleri, ayrıca hücre proliferasyonu, koloni formasyonu, sağkalım, invazyon/metastaz ve hücre ölüm/hücre siklusu üzerine ve bunları düzenleyen yolaklara olan etkileri ile EF2K ilişkisi tam olarak bilinmemektedir. Tüm bu bilginin ardından, çalışmada nöroblastoma hücrelerinde Rottlerin ve Genistein’in ayrı ayrı ve kombine olarak bu hücre davranışları üzerine olan etkileri incelenmiştir. Yöntemler: Bu çalışmada insan nöroblastoma kanser hücre hatları (SH-SY5Y, Kelly) kullanılmıştır. Tedavi amacıyla Rottlerin ve Genistein uygulanmıştır. İn vitro deneyler olarak, hücre proliferasyonu, koloni formasyonu, invazon/migrasyon, yara iyileşmesi testi, flow sitometri ile apoptoz ve hücre siklusu analizleri ile western blot analizi gerçekleştirilmiştir. Bulgular: Çalışmamızdaki bulgular Rottlerin ve Genistein tedavilerinin nöroblastoma hücrelerinde sırasıyla 5 µM ve 30 µM dozlarda hücre proliferasyonu, koloni formasyonu, invazyon/migrasyon ve yara iyileşmesi kapasitelerinde önemli düzeyde azalmalara neden oldukları görüldü. Bu dozların kombinasyonları da aynı analizlerdeki inhibisyon düzeylerini artırdı. Ek olarak bu ilaçlar nöroblastoma hücrelerinde apoptoz düzeylerinde de artışa sebep oldu. Bunun yanında yine aynı ilaçlar G1 hücre siklusu arrestine de neden oldu. Ayrıca, Rottlerin ve Genistein tedavilerinin EF2K overekspresyonunu önemli düzeyde azalttığı ve bu downregülasyona bağlı olarak in vitro nöroblastoma hücre proliferasyonu, koloni formasyonu ve invazyon/migrasyonunu inhibe ettikleri gösterildi. Western blot bulguları nöroblastoma hücrelerinde EF2K’in pro-tümörojenik, metastatik protein ve yolaklardaki upregülasyon üzerinden tümörogenez ve metastazı artırabileceği ve Rottlerin ile Genistein’in anti-proliferatif, anti-metastatik ve apoptotik etkilerini olasılıkla EF2K downregülasyonu üzerinden ortaya koyabildiğini gösterdi. Sonuç: Sonuç olarak tüm bu veriler ile birlikte Rottlerin ve Genistein’in nöroblastoma hücrelerinde hücre proliferasyonu, koloni formasyonu, invazyon/migrasyonu ve hücre siklusu/apoptoz üzerine önemli etkilere sahip olduğu ortaya konulmuştur. Dahası, Rottlerin ve Genistein’in bu etkilerini bu kanserde yeni bir potansiyel terapötik hedef olarak EF2K downregülasyonu üzerinden ortaya koyabilecekleri gösterilmiştir. Özetle, kombine olarak Rottlerin ve Genistein ile tedavi, ileride yapılacak ilave çalışmaların ışığında ve yeni nano ilaç taşıyıcı sistemlerin de yardımıyla nöroblastoma hastalarında faydalı ve uygulanabilir bir girişim olabilecektir.