HEK293F hücrelerde Toxoplasma gondii GRA1 ve ROP6 rekombinant proteinlerinin farklı besiyeri ortamlarında ekspresyonu ve saflaştırılması
Proje no. 29652 · Durum: Kapanmış (Yayın bekleniyor) · 2023
Özet
<p>Dünya çapında yaklaşık 3,5 milyar insanın, yaygınlığı coğrafi, iklimsel ve sosyoekonomik koşullara bağlı olarak değişen oranlarda <em>Toxoplasma gondii</em> adlı parazitin neden olduğu toksoplazmozisten etkilendiği tahmin edilmektedir. Ciddi klinik tablo ve ekonomik kayıplara yol açan toksoplazmozis tedavisinde halen kullanılabilir %100 etkili bir ilaç olmadığı için <em>T. gondii</em>’ye karşı hem insan hem de hayvanlarda kullanılmak üzere etkin ve koruyucu bir aşıya ihtiyaç duyulmaktadır. Henüz toksoplazmozise karşı bu özellikte güvenli ve etkin bir aşı bulunmamaktadır. Döşkaya ve arkadaşlarının 2018 yılında yaptığı çalışmada protein microarray tarama ile <em>T. gondii</em>’ye ait 2870’ten fazla ekzon ürünün antijenik potansiyeli araştırılmıştır. Tarama sonucunda bunların içinden 240 protein, aşı adayı olarak ortaya çıkmıştır. Bu aşı adayı proteinlerin içinde ROP6 ve GRA1 proteinleri insan ve fare antikor profillerinde yüksek immünite göstermiş olup aşı adayı olarak umut verici olduğu öngörülmüştür. Bu projenin amacı, aşı adayı <em>T. gondii</em> GRA1 ve ROP6 proteinlerini literatürde ilk defa iki farklı kültür ortamında üretilen memeli süspanse HEK293F hücrelerinde eksprese etmek ve sonrasında aşı antijeni olacak şekilde ileri kromotografik yöntemlerle saflaştırmaktır. İki farklı hücre kültürü ortamında karşılaştırmalı olarak elde edilecek sonuçlar doğrultusunda, süspanse HEK293F memeli hücrede eksprese edilen rekombinant GRA1 ve ROP6 proteinlerine ait en verimli üretim biyoprosesi; ekspresyon ve saflaştırma aşamalarını içerecek şekilde tanımlanacak ve böylece toksoplazmozise karşı daha hassas tanısal testler, daha koruyucu aşı ve ilaçların geliştirilmesinde kullanılabilecek yenilikçi rekombinant proteinler geliştirilecektir.</p>