Nükleik asit taşıyıcı olarak hibrit nanopartikül sistemlerinin hazırlanması ve kanser hücreleri üzerinde etkinliğinin incelenmesi
Proje no. 30842 · Durum: Kapanmış (Yayın bekleniyor) · 2023
Özet
<p>Nanotaşıyıcı sistemler, genetik materyalin hedef hücrelere seçici bir şekilde ulaşmasını sağlayarak gen tedavisinde önemli bir rol oynar. Genetik materyalın hücrelerdeki etkisini artırmak için lipit-bazlı ve polimer-bazlı taşıyıcılar kullanılır. Lipit-bazlı taşıyıcılar arasında, anyonik lipozomlar, pH’ya duyarlı lipozomlar ve katyonik lipozomlar yaygın olarak kullanılır. Polimer-bazlı taşıyıcılar arasında ise katyonik polimerler ve lipidler, genetik materyali elektrostatik olarak bağlar ve hücresel alımını kolaylaştırır. Bu taşıyıcı sistemler, terapötik yükün enzimatik bozulmaya karşı korunmasını, bağışıklık sistemi tarafından hedef alınmasının önlenmesini ve yan etkilerin azaltılmasını sağlar.</p><p>Bu araştırma, yeni nanotaşıyıcı hibrit sistemlerin oluşturulmasıyla transfeksiyon etkinliğinin artırılması ve transfeksiyon kaynaklı toksisitenin azaltılmasının araştırılmasını amaçlamaktadır. Endozomal kaçış sağlayan lipooligomerlerin sisteme dahil edilmesiyle hazırlanan lipit nanopartikül (LNP) formülasyonlarının gen taşıma etkinliği artırılmaya çalışılacaktır. Önerilen çalışmada pDNA yüklemesi yapılacak, yeni hibrit taşıyıcı sistemlerin optimal formülasyonunun belirlenmesi ve geliştirilen formülasyonun belirli hücre hatlarında transfeksiyon etkinliğinin saptanması hedeflenmektedir. LNP:lipooligomer:pDNA hibrit sistemlerinin hazırlanışı DOPC, kolesterol ve DOTAP bileşiklerinden oluşan LNP’lere değişen oranlarda lipooligomer eklenmesi ve bunların pDNA ile kompleks haline getirilerek yapılacaktır.</p><p>Oluşturulan komplekslerin agaroz jel elektroforeziyle incelenmesi, partikül büyüklüğü ve yüzey yükü tayininin DLS yöntemiyle ölçülmesi ve TEM analiziyle morfolojik özelliklerinin incelenmesi planlanmaktadır. Formülasyonların fizyolojik şartlarda stabilitesinin incelenmesi için serum varlığında ve anyonik ajanlar varlığında kompleks bütünlüğünün test edilmesi amaçlanmaktadır. Hücre kültürü çalışmalarında, hücre canlılığı tayini, transfeksiyon etkinliğinin incelenmesi fotometrik yöntemle ölçülecektir. Hücreye alınma düzeyinin tespiti için floresan işaretli komplekslerin uygulandığı hücreler flow sitometride tanımlanacaktır. Ayrıca, tasarlanan komplekslerin hücre içi yerleşiminin incelenmesi için floresan mikroskop altında incelenecektir. Sonuç olarak, bu çalışmanın temel amacı, yeni bir kompleks formülasyonu geliştirerek genetik materyallerin hücreye alınmasını ve transfeksiyon verimliliğini artırmaktır. </p><p>Bu çalışma, gelecekte kanser hastalıklarının tedavisine yönelik referans olarak kullanılabilir ve ekonomik bir tedavi alternatifi olabilir.</p>