CRISPRCas9 Teknolojisi ile invitro F9 Geninin Fonksiyonunun Bozulmasının Sağlanması
Proje no. 23766 · Durum: Kapanmış (Yayın bekleniyor) · 2022
Özet
Hemofili B, Faktör IX (F9) eksikliği sonucunda gelişen nadir bir kalıtsal hasatlıktır. F9 geni kromozom Xq27.1 üzerinde bulunup kanın pıhtılaşmasında rol oynamaktadır. F9’de meydana gelen, nokta mutasyonları, delesyonlar, insersiyonlar, duplikasyonlar, karmaşık değişiklikler, İndel mutasyonları ve polimorfizmler Hemofili B hastalığına neden olan mutasyonlardır (Goodeve, 2015). Nokta mutasyonları (tek nükleotid değişiklikler) en yaygın gen defekti sayılır ve yaklaşık olarak hemofili hastalarının % 90'nında bulunmaktadır (Bowen, 2002). Ağır hemofili B tanılı olguların yaklaşık %80ı bu genin yanlış anlamlı (amino asitte değişikliğe sebep olan gen mutasyonu), anlamsız veya çerçeve kayması mutasyonlarından kaynaklanır (Miller CH et al, 2013). Hemofili “tek gen hastalığı” olması açısından genetik tedavi yaklaşımı için ideal hastalıklardan biri olarak görünmektedir (Guan et al., 2016).<br /> <br /> Çalışmamızda, karaciğer hücre hattında F9 geninin belirlediğimiz bölgesinden genom düzenleme yöntemlerinden CRISPR-Cas9 (Düzenli aralıklarla bölünmüş palindromik tekrar kümeleri) sistemi kullanılarak çift sarmallı DNA’yı kesip F9 proteinin yapımının engellenmesi sağlanacaktır. <br /> <br /> F9 geni, DNA sekansına tabi tutulacak ve meydana gelen indel mutasyonlar belirlenip, Real Time-PCR ile F9 gen ifadesi ve Western blot yöntemi ile F9 protein ifadesi incelenecektir. Bu yöntemin laboratuvarımızda daha sonra genomdaki mutasyonların düzeltilebilmesi için kullanılabileceği öngörülmektedir.