ANTİBİYOFİLM AJANI OLARAK DNA APTAMERLERİNİN SALMONELLA BİYOFİLM OLUŞUMUNA ETKİSİ
Proje no. 439 · Durum: Kapanmış · 2017
Özet
Beş Salmonella enterica serovarları, biyofilm oluşturma yetenekleri açısından test edilmiştir, bunların arasında S. Enteritidis 6 (2014) ve S. Enteritidis (86) suşlarının, en yüksek biyofilm oluşturma kabiliyetine sahip olduğu görülmüştür. Bu nedenle bu iki suş ileri denemeler için seçilmiştir. Bir GST füzyon proteini olarak pGEX-4T-1 vektörüne klonlanmış olan SipA proteinin optimum üretimi, Rosetta hücreleri kullanılarak elde edilmiştir. Saflaştırılan SipA proteini, SELEX yöntemi kullanılarak aptamerler geliştirmek için kullanılmıştır. Karakterize edilmiş Apt17 inhibisyon çalışmalarında kullanılmıştır. Apt17 (2 µM) S. Enteritidis 6 (2014) ve S. Enteritidis (68) suşları ile birlikte inkübe edildiğinde sırasıyla %24.34 ve %26.81 oranında biyofilm oluşumunu inhibe ettiği görülmüştür. SEM ile biyofilm oluşumu analiz edildiğinde, Apt17 ile muamele edilen S. Enteritidis 6 (2014) biyofilmlerinin 3D yapıyı oluşturmadığı ve matriks yapısının da kontrol ile karşılaştırıldığında aynı olmadığı gözlemlenmiştir. Öte yandan, Apt17 ile muamele edilen S. Enteritidis (68) hücrelerinin cam yüzeyi kaplamadığı da görülmüştür. Yapılan adezyon ve invazyon analizlerinde ise Apt17 (2 µM), Caco-2 hücre hattının adezyonunu % 25–70 oranında ve invazyonunu ise % 18.03 – 39.5 oranında inhibe etmiştir.