KORDON KANI HEMATOPOİETİK KÖK HÜCRELERİNDEN FARKLILAŞTIRILAN DOĞALÖLDÜRÜCÜ HÜCRELERİN GLİOBLASTOMA TÜMÖR HÜCRELERİ ÜZERİNDEKİETKİNLİĞİNİN İN VİTRO OLARAK İNCELENMESİ
Proje no. 91 · Durum: Kapanmış · 2017
Özet
Glioblastoma en yaygın ve en malign primer erişkin beyin tümörüdür. Ortalama sağkalım süresi 15 ay ve cerrahi, radyoterapi ve kemoterapiye rağmen sağkalım oranı %4-5’tir. Kordon kanı CD 34+ hematopoetik kök hücreler (HKH) açısından zengin bir kaynaktır. Kordon kanından elde edilen hematopoetik kök hücre (KK-HKH)’lerin miktarı ve proliferasyon kapasitesi kemik iliğinden elde edilen HKH’lere göre daha yüksektir. KK- HKH’ler ve umbilikal kord kökenli mezenkimal kök hücreler (UK-MKH) multipotent özellikte olması nedeni ile tıbbın birçok alanında kullanım potansiyeline sahiptirler. Kemik iliği kökenli doğal öldürücü immün sistem hücreleri olan Natural Killer (NK) hücrelerin antitümoral ve antiviral özelliği bilinmektedir. NK hücreleri perforin ve granzim B gibi sitotoksik proteinleri, apoptoz indükleyici reseptörleri ve sitokin aracılı antitumor etkileri yanısıra antikor bağımlı sitotoksisitesi ile tümör hücrelerini elimine ederler. Bu çalışmada UK-MKH’lerden oluşturulan besleyici tabaka üzerinde CD34 + KK-HKH’lerden farklılaştırılma protokolü kullanılarak elde edilen NK hücrelerinin glioblastomaya ait immortalize bir hücre hattı olan T98G hücreleri ile ko-kültüre edilmesi ve glioblastoma tümörü üzerinde NK hücrelerinin etkinliğinin araştırılması amaçlanmıştır. Mitomycin-C ile proliferasyonları engellenen UK-MKH besleyici tabakası üzerinde KK-HKH’i NK hücrelerine diferansiye edilmiştir. Ardından indirekt immunoperoksidaz yöntemi ile NK hücrelerinin immunohistokimyasal karakterizayonu yapılmıştır. UK-MKH besleyici tabakası üzerinde KKHKH’inden farklılaştırılan NK hücreleri ile T98G glioblastoma hücreleri ko-kültüre edilerek NK hücrelerinin tümor hücreleri üzerinde etkin olduğu belirlenmiştir. Bunun için Annexin V yöntemi ile tümör hücrelerinde apoptozun indüklenip indüklenmediği belirlenirken RT-PCR yöntemi ile de kanser ile ilişkili K-ras, P53, TGFBR2 genlerinin ve tümör gelişiminden, invazyon ve metastazından sorumlu kanser kök hücreleri ile ilişkili olarak da Oct3/4 ve NANOG genlerinin ekspresyon analizleri yapılmıştır. NK hücreleri, glioblastoma hücreleri üzerinde yapılan bu in vitro çalışmanın sonuçlarına göre immünoterapötik açıdan verimli ve etkin bir hücresel tedavi modeli oluşturmaktadır.