MEME KANSERİNE KARŞI HER2/NEU ANTİJENİ VE SAPONİN ADJUVANI İÇEREN AŞI KOMBİNASYONUNUN GELİŞTİRİLMESİ
Proje no. 422 · Durum: Kapanmış · 2016
Özet
Günümüz meme kanser vakalarının %20’sini HER2 pozitif meme kanseri oluşturmaktadır. Günümüz kanser tedavi yöntemleri hasta vücudunda birçok yan etkiyi de beraberinde getirmektedir. Bu nedenden dolayı, güncel kanser tedavi araştırma çalışmaları immünoterapötik yöntemlere yönelmiştir. İmmünoterapi, kısaca vücudun bağışıklık sistemini kullanarak kanser hücrelerine karşı tetikleme yöntemi olarak bilinmektedir. Tez çalışmasında, yeni bir kombinasyon immünoterapi modeli olarak HER2/Neu antijeni yüklenen dendritik hücre bazlı aşı ile saponin adjuvanını (QS-21) birlikte kullanarak bir kombinasyon immünoterapi modeli geliştirilmeye çalışılmıştır. Çalışmada anti-PD-L1 monoklonal antikoru ve kemoterapötik ajan olan doksorubisin içeren farklı formülasyonlar da çalışmaya dahil edilmiştir. Bu aşı sayesinde hem bağışıklık hücrelerinin tümöre karşı tetiklenmesi, hemde tümör hücrelerinin immün sistemden evazyonunun engellenmesi hedeflenmiştir. Çalışmada 2 ana deney seti kurularak gerçekleştirilmiştir. Ilk deney setinde, aktif immünoterapi ile pasif immünoterapi birlikte kullanılmıştır. İlk deney setinde 1.5 x 106 hücre/ml HER2 pozitif 4T1 hücreleri 6-8 haftalık farelere çalışmanın 0. gününde xenograft model oluşturulmuş ve aşılama prosedürü 1. gün başlayıp; haftada 1 kere toplam 2 hafta boyunca uygulanmıştır. Çalışmada anti-PD-L1 monoklonal antikoru ise 4. ve 9. günlerde farelere uygulanmıştır. İkinci deney setinde ise aktif ve pasif immünoterapi yaklaşımlarına ek olarak kemoterapötik bir ajan olan doksorubisin de eklenmiştir. İkinci deney setinde ise 5 x 106 hücre/ml HER2 pozitif 4T1 hücreleri 6-8 haftalık farelere çalışmanın 0. gününde enjekte edilmiş, ve aşılama prosedürü 4. gün başlayıp; haftada 1 kere toplam 2 hafta boyunca uygulanmıştır. Çalışmada anti-PD-L1 monoklonal antikoru ise 4. ve 9. günlerde farelere uygulanmıştır. Doksorubisin ise, çalışmanın 5. ve 10. günlerinde farelere uygulanmıştır.Çalışma sonunda sakrifiye edilen farelerin ağırlıkları ve tümör boyut ölçümü yapıldıktan sonra tümör, dalak dokuları ve kan örnekleri toplanmıştır. Kullanılan aşı kombinasyon etkinliğini belirlemek amacı ile, LDH assay, flow sitometri ile CD8+ T hücre, ELISA ile HER2 spesifik antikor (IgG, IgG1, IgG2a) tayini ve immünohistokimya (CD4+, CD8+, CD61+) çalışmaları yürütülmüştür.Çalışmada farklı aşı kombinasyonu denenmiş ve elde edilen bulgularda etkili aşı kombinasyonlarının tümör hacimlerinde anlamlı küçülmeler gözlemlenmiştir. İlk çalışmada DH+HER2/Neu+QS-21+anti-PD-L1 kombinasyonu en etkili kombinasyon olarak öne çıkmış ve spesifik sitotoksite çalışmasında %40 hücre ölümüne neden olmuştur. Uygulanan ayni formülasyona ait fare grubundan alınan kan serum örneklerinde anti-HER2 antikor titresi anlamlı düzeyde yüksek çıkmış, ve bu gruba ait total CD8+ T hücre popülasyonu ile IFN-? salgılayan CD8+ T hücre popülasyonunda kontrol ile diğer aşı gruplarına göre anlamlı farklar elde edilmiştir. Ayrıca CD4+, CD8+ ve CD61+ hücre popülasyonlarının incelendiği immünohistokimya çalışmaları ile elde edilen bulgular birbiriyle parallel olmaktadır. En etkili formülasyon olarak bulunan gruba ait tümör kesitlerinde immün hücre popülasyonunda diğer gruplara göre artış olduğu gözlemlenmiştir. Yürütülen 2. çalışmada ise en etkili kombinasyon Doksorubisin+DH+HER2/Neu+QS-21+anti-PD-L1 kombinasyonu olarak öne çıkmış ve spesifik sitotoksite çalışmasında %50 hücre ölümüne neden olmuştur, Uygulanan ayni formülasyona ait fare grubundan alınan kan serum örneklerinde anti-HER2 antikor titresi anlamlı bir şekilde yüksek çıkmış, ve bu gruba ait total CD8+ T hücre popülasyonu ile IFN-salgılayan CD8+ T hücre popülasyonunda anlamlı farklar elde edilmiştir. Ayrıca CD4+, CD8+ ve CD61+ hücre popülasyonlarının bakıldığı immünohistokimya çalışmaları ile elde edilen bulgular birbirine parallel olmaktadır. En etkili formülasyon olarak bulunan gruba ait tümör kesitlerinde immün hücre popülasyonunda diğer gruplara göre artış olduğu gözlemlenmiştir.Kullanılan immün kontrol noktası inhibis