Anaplastik Tiroid Kanser hücrelerinde Epigallokateşin-3-gallat ve Dabrafenib kombinasyonunun apoptoz ve gen ifadesi üzerine etkileri
Proje no. 20389 · Durum: Kapanmış · 2019
Özet
Tiroid kanserlerin %2 sini oluşturmakta olan anaplastik tiroid kanserler (ATK) tiroid kanser ölümlerinin % 40 ından sorumludur. Moleküler patogenezi halen çalışılmakta olan ATK’ler standart kemoterapatiklere direnç göstermektedir. Prognozu kötü seyreden ATK olguları % 45 BRAF V600E mutasyonu sorumlu tutulmaktadır. BRAF mutasyonu tiroid kanserinde DNA üzerinde anormal metilasyona sebep olarak epigenetik modifikasyonlarla da ilişkilendirilmektedir. Dabrafenib (Dab) MAPK sinyal yolağıdaki BRAF mutasyonunu hedef alan kemotörapatik ilaçtır. Yeşil çayda en çok bulunan doğal polifenol bileşik Epigalalokateşin-3-gallat (EGCG) ise kanser çalışmalarında rolü araştırılmakta olan bitkisel DNA metiltransferaz inhibitörüdür. (DNMTi). Bu doğrultuda, genetik ve epigenetik yolaklar hedeflenerek planlanmış tez çalışmamızda Dab’in, anti-tümör etkisini arttırmak için EGCG ile kombinasyonunun, öngörülen olası sinerjistik etkisi ile apoptozu indüklemesi ve epigenetik mekanizmalarda görevli gen ifade değişikliklerinin tespit edilmesi hedeflenmiştir. Tez çalışmamız in-vitro şartlar altında gerçekleştirilmiştir. BRAF V600E/mut ATK modeli olarak SW 1736 hattı kullanılmıştır. Hücrelerinin canlılıkları tripan mavisi boyama testi ile kontrol edilmiştir. Dab. ve EGCG’ nin sitotoksik etkisi WST- 8 testi ile, apoptotik etkisi ise Annexin V-FITC yöntemi kullanılarak belirlenmiştir. Epigenetik mekanizmalarla ilişkili 84 genin ekspresyon değişimleri gerçek zamanlı RT- qPCR ile tesbit edilmiştir. SW 1736 hücrelerine ilk kez uygulanmış olan Dab. ve EGCG kombinasyonunun, konsantrasyona bağlı olarak hücre canlılığını önemli ölçüde azalttığı ve birlikte aditif etki göstererek apoptozu 33 kat indüklediği tespit edilmiştir. 48. saat için IC50 dozları Dab 6.3 µM ve EGCG 22.5 µM, bulunmuştur. Epigenetik mekanizmalarda görevli 24 gende anlamlı ifade değişiklikleri tespit edilmiş, ileri moleküler çalışmalara yol gösterici olarak literatüre katkıda bulunmuştur. İn-vivo çalışmalar ile desteklenmesi ardından Dab ve EGCG kombinasyonunun anaplastik tiroid kanser tedavisinde klinikte katkı sağlayacağını öngörmekteyiz.