Kluyveromyces lactis Maya Hücrelerinden Laboratuvar Ölçekte Vasküler Endotelyal Büyüme Faktörü (VEGF) Üretiminin Optimizasyonu, VEGF Spesifik ELISA ve Biyosensör Esaslı Tanı Kitlerinin Geliştirilmesi
Proje no. 21791 · Durum: Kapanmış · 2020
Özet
Kan dolaşımında bulunan biyobelirteçlerin spesifik olarak kesin ve hızlı bir şekilde belirlenmeleri klinik tanı ve hastalığın takip edilebilmesi açısından önemlidir. Vasküler endoteliyal büyüme faktörü (VEGF) kanser, romatoid artrit, endometriotik lezyon, beyin yaralanmaları ve Parkinson hastalığı gibi farklı insan hastalıkları ile ilişkili bir sinyal proteini olarak bilinmektedir. Bunun yanında yara iyileşmesi, kemik gelişimi, apoptozise karşı koruma ve kemotaksis gibi fizyolojik olaylarda VEGF düzeyindeki artış önemli bir etkiye sahiptir. VEGF’nin hassas, hızlı ve ucuz olarak belirlenebilmesi hem klinik çalışmalar hem de temel araştırma çalışmalarında önem arz etmektedir. Günümüzde VEGF seviyesini saptamak için kullanılan floresan spektrometrisi, radyoimmünoassay, immünohistokimyasal gibi teknikler zaman, emek, maliyet ve yüksek teknolojiye sahip cihaz gereksiniminden dolayı yaygın kullanım için kısıtlamalara sahiptir. Mevcut yaklaşımlar incelendiğinde afinite temelli yaklaşımlar VEGF proteinin belirlenmesinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Bunların içerisinde VEGF’e spesifik antikor ve aptamer kullanımı farklı avantaj ve dezavantajlara sahip en yaygın iki yaklaşımdır. Bu projenin temel amacı, yüksek spesifikleri ve düşük maliyetli olmaları nedeniyle antikor temelli ELISA ve biyosensör geliştirilmesine dayanmaktadır. İki farklı ELISA kiti ile hem VEGF hem de VEGF antikoru tespit edilebilecektir. Ayrıca biyosensör geliştirmede antikorların nanoparçacık yüzeyine immobilizasyonu ile oluşturulan multi valens yapı antikorun az miktarda kullanılmasını ve duyarlılığın arttırılmasını sağlamaktadır. Çalışmalarında kullanılacak olan VEGF proteini rekombinant DNA teknolojisi yöntemi kullanılarak <em>Kluyveromyces lactis</em> maya hücrelerinde üretilerek saflaştırılacaktır. Projenin desteklenmesi durumunda ‘VEGF spesifik ELISA ve biyosensör’ yerli ve milli bir biyoteknolojik ürün olarak elde edilecektir.