CRISPR-Cas9 Teknolojisi ile in vitro F8 Geninin Fonksiyonunun Bozulmasının Sağlanması
Proje no. 20393 · Durum: Kapanmış (Yayın bekleniyor) · 2019
Özet
Hemofili A, F8 eksikliği sonucunda gelişen nadir bir kalıtsal hastalıktır. F8’de meydana gelen intron 1 ve intron 22 inversiyonları, nokta mutasyonları, delesyonlar, insersiyonlar ve yeniden düzenlemeler Hemofili A hastalığına neden olan mutasyonlardır (Rossetti et al., 2008). Ağır hemofili A tanılı olguların yaklaşık yarısında veya tüm olguların yaklaşık %30 kadarında “F8 intron 22 inversiyon mutasyonu” bulunmaktadır (Bowen, 2002; Park et al., 2015). Nokta mutasyonları (tek nükleotid değişiklikler) en yaygın gen defekti sayılır ve yaklaşık olarak hemofili hastalarının %90'nında bulunmaktadır (Bowen, 2002). Hemofili “tek gen hastalığı” olması açısından genetik tedavi yaklaşımı için ideal hastalıklardan biri olarak görülmektedir.<br /> <br /> Çalışmamızda, karaciğer hücre hattında F8 geninin belirlediğimiz bölgesinden genom düzenleme yöntemlerinden CRISPR-Cas9 (Düzenli aralıklarla bölünmüş palindromik tekrar kümeleri) sistemi kullanılarak çift sarmallı DNA’yı kesip F8 proteinin yapımının engellenmesi sağlanacaktır. <br /> <br /> F8 geni, DNA sekansına tabi tutulacak ve meydana gelen İNDEL mutasyonlar belirlenip, Real Time-PCR ile F8 gen ifadesi ve Western blot yöntemi ile F8 protein ifadesi incelenecektir. Bu yöntemin laboratuvarımızda daha sonra genomdaki mutasyonların düzeltilebilmesi için kullanılabileceği öngörülmektedir.<br />