TERMOFİLİK BİR AKTİNOMİSET OLAN THERMOBİFİDA FUSCA EFTL 17 SUŞUNDAN KSİLANAZ GENİNİN KLONLANMASI VE REKOMBİNANT PROTEİNİN ÜRETİLMESİ
Proje no. 573 · Durum: Kapanmış · 2014
Özet
Bu tezde, Thermobifida fusca EFTL 17 suşundan ksilanaz geninin izole edilmesi, ökaryotik (Kluyveromyces lactis) ve prokaryotik (Escherichia coli) konukçular kullanılarak ksilanaz geninin klonlanması ve rekombinant proteinin üretilmesi incelenmiştir. Tezde ilk olarak, Thermobifida fusca EFTL 17 suşu ksilan içeren modifiye ksilan (+) termoaktinomiset ortamında geliştirilmiştir ve ksilanazın farklı koşullar altındaki enzim aktivitesi kontrol edilmiştir. Enzimin optimum aktiviteyi ksilan (+) TA ortamında, 55oC’de ve pH 7,2 da gösterdiği ve 166,5 U/mL olduğu belirlenmiştir. Tezin bu aşamasında ise, Thermobifida fusca EFTL 17 ’nin ksilanazı transkripte eden gen bölgesi E. coli’ye klonlanmış ve transformasyon miktarı ve koloni sayısının beklenenden daha düşük olduğu belirlenmiştir.