Periferik Sinir Hasarında Olfaktör Mukozal Mezenkimal Kök Hücrelerinin Terapötik Etkinliğinin İncelenmesi
Proje no. 31851 · Durum: Kapanmış (Yayın bekleniyor) · 2023
Özet
<p>Olfaktör mukozanın (OM) lamina propriasında yer alan olfaktör kılıf hücreleri (OEC'ler), olfaktör dokuya koku alma duyusunu korumak için çevresel yaralanmalara yanıt olarak yaşam boyu nörogenez sağlar. Hem olfaktör sinir aksonlarında hem de olfaktör bulbusta bulunan bu kök hücrelerin sadece OSN’leri değil, aynı zamanda olfaktör epiteldeki diğer hücre bileşenlerini de ürettiği rapor edilmiştir. Yüksek farklılaşma yeteneklerinin bir sonucu olarak, OEC'ler rejeneratif tedavilerin uygulanması için kullanılabilme potansiyelindedir. OM kök hücrelerinin izolasyonu, onları mezenkimal kök hücrelerden ayıran özelliklerini gösterecek şekilde gerçekleştirilecek ve daha sonra periferik sinir yaralanmalarının tedavisi için nöroterapi olarak uygulanacaktır. Çalışmamız hayvan modelinde <strong><u>femoral sinir yaralanmalarında tedavi olarak kök hücre kullanımını araştıran ilk çalışma niteliğindedir.</u></strong></p><p><strong>Yöntemler: </strong>Olfaktör Mukozal Mezenkimal Kök Hücrelerinin (OM-MKH) hücre kültürü yapılacaktır<strong>. </strong>OEC’ler için sıralı markerlar kullanılararak immünsitokimyasal boyaması yapılacaktır. Bu aşamada GFAP, p75 (GFAP-p57 oranı saflığın tespiti için) markerları kullanılacak, ayrıca heterojenitenin tespiti için Nestin boyama yapılacaktır. Daha sonra periferik sinir hasar kesi modeli oluşturulup, periferik sinir onarımı için yetişkin olfaktör mukoza kılıf hücrelerinin in vivo uygulaması yapılacaktır. Uygulanan hücrelerin etkinliğini mikroskobik olarak incelemek için elektron mikroskobu takibi yapılıp, epon uzaklaştırılacaktır. Daha sonra H&E ve Toluidin Blue boyamaları ile histolojik veri eldesi ve OEC'ler için GFAP, p75 ve nestin ekspresyonlarını belirlemek için immünohistokimya yapılacaktır. Ayrıca transplantasyondan sonra siliyer nörotrofik faktörün (CNTF) ekspresyonu için de boyama yapılacaktır. RT-qPCR analizi ile BDNF, NT3, NT4 genlerinin analizleri yapılacaktır. Grid walking test, foot print test, five toe spread test uygulanarak hayvan hareketinin düzenliliğinin ve nöral fonksiyonların tekrar kazanımını değerlendirilecektir. Son aşamada ise elde edilen verilerin istatistiksel analizi ve sonuçlarının değerlendirmesi yapılacaktır.</p>