Eritrosit GALT enzim aktivitesinin belirlenmesi için LC MS/MS metodu geliştirilmesi optimizasyonu ve validasyonu
Proje no. 20812 · Durum: Kapanmış · 2019
Özet
Çoğunlukla galaktoz-1-fosfat üridiltransferaz(GALT) eksikliğiyle gelişen galaktozeminin tanısı eritrosit içi GALT-enzim aktivitesinin belirlenmesiyle mümkündür. Erken tanı ve tedavinin kritik olduğu bu hastalıkta, enzim aktivitesinin yüksek doğruluk ve güvenirlilik ile belirlenmesi, etkin bir tarama programı ve hastalığın ayırıcı tanısı için önemlidir. Bu çalışmada, hemolizat ve kuru-kan damlası (KKD) örneklerinde GALT aktivitesinin tayinine yönelik, analitik açıdan güçlü, sıvı kromatagrafi-kütle spektrometri(LC-MS/MS) temelli bir yöntem geliştirilmesi; geliştirilen yöntemin valide edilmesi ve florometrik yöntem ile yöntem performansları açısından karşılaştırılması amaçlandı. Yöntem validasyon parametreleri kapsamında ölçüm limitleri, geri elde, tekrarlanabilirlik, matriks etkisi, seçicilik, taşıma etkisi ve referans aralık çalışmaları yapıldı geliştirilen yöntemin performans verileri tatmin edici bulundu. Analiz için en uygun örnek tüpünün belirlenmesi ve yöntem performanslarının karşılaştırılması amacıyla, farklı antikoagülan içeren kan tüplerinden elde edilen hemolizat ve KKD örneklerinin enzim aktiviteleri belirlenip ve sonuçlar yorumlandığında en uygun örneğin K2EDTA içeren tam kan örneği olduğu belirlendi. Geliştirilen LC-MS/MS yöntemi analitik açıdan, karşılaştırılan florometrik yönteme göre üstün bulundu. GALT enzim aktivitesinin belirlenmesinde LC-MS/MS metodunun kullanılması, hastalığın teşhisinde ve ayırıcı tanısında büyük kolaylıklar sağlayacağı gibi yenidoğan taramalarının etkinliğini de artıracağı öngörülmektedir. Anahtar Sözcükler: GALT; LC-MS/MS; yenidoğan taramaları; kuru kan damlası