YÜKSEK KATYONİK ÖZELLİKLİ NANOTEKNOLOJİK ADJUVANSİSTEMLERİNİN GELİŞTİRİLMESİ VE ETKİNLİĞİNİN HER 2 MEMEKANSERİ DNA AŞISI MODELİNDE GÖSTERİLMESİ
Proje no. 723 · Durum: Kapanmış · 2016
Özet
DNA aşıları son yıllarda farklı uygulama alanları bulmakta ve hem farklı türdeki enfeksiyöz ajanlara karşı hem de çeşitli kanser türlerine karşı aşı olarak kullanılmaktadır. Fakat, DNA aşılarının tek başına kullanıldığında serum nükleazlar tarafından hızlı degredasyona uğraması ve buna bağlı olarak da yarı ömürlerinin kısa olması istenilen seviyede yüksek immun yanıtı uyaramamalarına neden olmaktadır. Bu nedenle çeşitli stratejilerle bu immun yanıtın arttırılması gerekmektedir. Özellikle, yeni nanoteknolojik yaklaşımlar ile oluşturulan adjuvan sistemleri bu açıdan umut vaad etmektedir. Proje kapsamında, katyonik özellikli pHEMA-His/PEG, pHEMA-Kitosan/PEG, pHEMA-PEI/PEG ve pHEMA-DOTAP/PEG partikülleri oluşturuldu. Şekilsel ve boyutsal analizi, zeta potansiyeli ve partikül boyutu ölçümü, DNA yükleme kapsiteleri de belirlenerek karakterizasyon çalışmaları gerçekleştirildi. Ardından, CHO-K1, MCF-7 ve TUBO hücreleri üzerindeki sitotoksik etkilerine bakılıp in vitro transfeksiyon çalışmalarında kullanılacak konsantrasyon değerleri belirlendi. Son aşamada ise, çıplak DNA ve ticari satın alınan transfeksiyon ajanı kontrolünde, öncelikle pIRES2EGFP empty vektörü kullanılarak, daha sonra da Her2 pozitif meme kanserine karşı geliştirilen pIRES2-EGFP/DEC205ScFvMEHer2 DNA aşısı vektörü kullanılarak, pDNA/adjuvan formülasyonlarının in vitro transfeksiyon etkinlikleri floresan mikroskobi ve akış sitometrisi analizleri ile ölçüldü. Sonuç olarak, nano boyutlarda ve istenilen özelliklerde üretilebilen pHEMA temelli adjuvan sistemlerinin, farklı pDNA/adjuvan formülasyonları oranlarında kullanılması ile çıplak DNA’ya oranla in vitro transfeksiyon etkinliğini arttırdığı görüldü. Ticari satın alınan Lipofektamin 2000 ajanı ile kıyaslandığında ise; CHO-K1 ve MCF-7 hücreleri için pDNA/pHEMA-PEI polipleksinin 2:4 oranının, TUBO hücreleri için ise pDNA/pHEMADOTAP kompleksinin 2:6 oranının daha etkili transfeksiyon sağladığı saptandı. Bu nedenle, proje kapsamında geliştirilen bu adjuvan formülasyonlarının büyük ölçekte gerçekleştirilen transfeksiyon çalışmalarında ve in vivo çalışmalarda gen taşınımı ajanı olarak kullanılabilecekleri düşünülmektedir.