İnsan Nöroblastoma Hücre Hattında Ferroptozun Hedeflenmesi
Proje no. 23521 · Durum: Kapanmış · 2021
Özet
Siklooksijenaz (COX) enzimi araşidonik asitten prostaglandin oluşumunu katalizler. Kanser hücrelerinde yüksek düzeyde bulunan prostaglandinlerin tümör büyümesi ve gelişmesine katkı sağladığı gösterilmiş; bu durum COX enzim inhibitörü olan nonsteroidal antiinflamatuar ilaçların (NSAİİ) kanserde kullanımı ile ilgili çalışmaların önünü açmıştır.<br /> Bir molekülün antikanser etkinliğinin moleküler mekanizması apoptoz başta olmak üzere hücre ölüm yolakları aracılığıyla araştırılmaktadır. Fakat tedavi sırasında karşılaşılan apoptoz direnci nedeniyle son yıllarda ferroptoz üzerine çalışmalar artmıştır. Ferroptoz; hücre içi artmış demir iyonu, azalmış glutatyon peroksidaz-4 (GPX4) aktivitesi ve bunu takiben artmış lipid peroksidasyon ürünlerinin hücresel hasara sebep olması ile karakterize bir hücre ölüm şeklidir.<br /> Çocukluk çağında görülen kötü huylu bir tümör olan nöroblastomada COX-2, antiapoptotik bir protein olan Bcl-2 ve GPX4 protein ekspresyonunda artış dikkat çekicidir. Özellikle artan Bcl-2 nedeniyle antikanser ilaçlara karşı tümör, zamanla direnç kazanır. Projemizin amacı COX-2 inhibitörü bir ilaç olan selekoksibi nöroblastoma tedavisinde ferroptozu hedefleyerek değerlendirmektir.<br /> Öncelikle hücre canlılığında %50 inhibisyonu sağlayan konsantrasyonu belirlemek için farklı konsantrasyonlarda (0.1-100 µM) selekoksib insan nöroblastoma hücre hattına (SH-SY5Y) uygulanacak ve MTS yöntemi ile hücre canlılığı ölçülecektir. Ardından, ferroptoz inhibitörü varlığında selekoksibin hücre canlılığına etkisi değerlendirilecektir. Son olarak, selekoksib uygulanmış hücrelerde ferroptoz parametrelerinden GPX4 ve lipid peroksidasyon ürünü 4- hidroksinonenal (4-HNE-modifiye protein aracılığıyla) düzeyleri Western Blot tekniği ile ölçülecektir.<br /> Proje ile selekoksibin nöroblastomada ferroptotik hücre ölümüne etkisi araştırılmış olacak; aynı zamanda bir lisans öğrencisi deneysel aşamalarda görev alarak sağlık bilimleri alanındaki araştırmalarda yaygın olarak kullanılan teknikler hakkında bilgi sahibi olacaktır.