Explant Culture of Ovarian Tissue
Articles > Article · 2022
Authors: Murat Serkant Ünal, Elif Önder, Nazlı Çil, Hatice Şiyzen Çoban, Mücahit Seçme, Gül Özlem YILDIRIM, Gülcin Abban Mete
Van Medical Journal, International, 2022, vol 29, pp 421-427
Summary
Ovaryum, germinal epitel olarak adlandırılan tek katlı yassı epitelden, kübik epitele kadar değişkenlik gösteren modifiye pelvik mezotel ile çevrelenmiştir (1).Ovaryum korteks ve medulla'dan oluşmaktadır.Ovaryum folikülleri korteksin stromasında yerleşmiştir.Ovaryumun yapısal birimi olan folliküller, oositlere mikroçevre oluştururlar.Oositin çevresindeki folikül hücrelerinin dış yüzeyi bazal lamina ile sınırlandırılmıştır ve çevresinde stromal hücreler bulunur.Stromal hücrelerin dağılımı da sikluslara bağlı değişiklerden (foliküllerin gelişmesi, ovulasyon ve korpus luteum) oldukça çok etkilenir.Özellikle graaf folikülden oositin atılmasından sonra meydana gelen korpus luteum çok büyük hacimlere ulaşır ve hem hücrelerin hem de gelişen foliküllerin yerlerini değiştirir (2,3).Ovaryumda en çok bulunan folikül çeşidi primordiyal foliküldür (1).Primordiyal foliküller tek sıralı yassı folikül hücreleriyle çevrili bir primer oosit içerir.Daha sonra gelişen primer Özet Amaç: Ovaryum dokusu eksplant kültürü oluşturarak dokulardan göç eden stromal hücreleri izole etmeyi, çoğaltmayı ve karakterize etmeyi hedefledik.Gereç ve Yöntem: 2 adet 4 haftalık (prepubertal) dişi Wistar Albino tipi sıçanların ovaryum dokularından eksplant kültürler oluşturuldu.Daha sonra prolifere olan overyan stromal hücrelere 2. pasajda (P2) flow sitometri analizi yapılarak CD29, CD54, CD90 (mezenkimal kök hücre yüzey antijeni) ve CD45 (hematopoetik kök hücre yüzey antijeni) ifadelerine bakıldı.Bulgular: Kültür ortamındaki hücrelerin proliferasyon yetenekleri ve morfolojik özellikleri seri pasajlar yapılarak incelendi.Stromal hücreler 2. günde dokulardan göç ederek kültür kaplarına yapıştılar ve çoğalıp 7. günde konflue (%70-80) oldular.Kültür ortamındaki overyan stromal hücrelerin morfolojileri, faz kontrast mikroskobu ile incelendiğinde iğ şeklinde ve fibroblast benzeri hücre toplulukları olarak görüldü.Stromal hücre çoğalan kültür kaplarında mikroskop altında yapılan sayımda sırasıyla 2x10 6 ve 1.5x10 6 hücrenin ürediği gözlemlendi.İzole edilen overyan stromal hücrelerin flow sitometri analizlerinde CD54, CD90 ve CD45 yüzey antijenlerini eksprese ettikleri, CD29 yüzey antijenlerini ise eksprese etmedikleri belirlendi.Sonuç: Yapılan analizde kültür ortamında izole edip, ürettiğimiz overyan stromal hücrelerin hem hematopoetik hem de mezenkimal kök hücre belirteçlerinden bazılarını eksprese ettiklerini belirledik.