Infecting Glial Cells with Antimony Resistant Leishmania tropica: A New ex-vivo Model

Orçun ZORBOZAN; Mehmet Harman; Vedat EVREN; Mumin Alper Erdogan; Aslı KILAVUZ; Varol Tunalı; Ibrahim Cavus; Özlem YILMAZ; Ahmet Ozbilgin; Nevin TURGAY AKÇİÇEK

doi:10.5578/mb.66350

Infecting Glial Cells with Antimony Resistant Leishmania tropica: A New ex-vivo Model

Makaleler > Tam Makale · 2018

Yazarlar: Orçun ZORBOZAN, Mehmet Harman, Vedat EVREN, Mumin Alper Erdogan, Aslı KILAVUZ, Varol Tunalı, Ibrahim Cavus, Özlem YILMAZ, Ahmet Ozbilgin, Nevin TURGAY AKÇİÇEK

MIKROBIYOLOJI BULTENI, SCI Expanded İndekslerine Giren Dergi, Uluslararası, 2018, cilt 52, ss 49-55

DOI: 10.5578/mb.66350

Özet

Leyşmanyazis; kutanöz, mukokutanöz, viseral ve viserotropik formlar gibi farklı klinik özelliklere  sahip vektör kaynaklı zoonotik bir hastalıktır. Leyşmanyazis ilaç tedavisinde kullanılan protokoller toksik etkilere sahiptir ve uygulamalar sırasında birçok kısıtlılık oluşmaktadır. Tedavi ile ilgili kısıtlılıklardan en önemlisi uygulanan protokollere karşı gelişen dirençtir. Özellikle dirençli hastalar için yeni tedavi seçeneklerinin geliştirilmesine ihtiyaç duyulmaktadır. Antimona direnci olan hastalarda yeni ilaç seçeneklerinin değerlendirilmesi için in-vitro ve in-vivo çalışmalara ek olarak, primer hücre kültürlerini kullanan ex-vivo modellerin iyi bir kaynak olabileceği düşünülmektedir. Bu çalışmada, tedaviye yanıt vermeyen kutanöz leyşmanyazisli hastalarda tedavi seçeneklerini değerlendirmek için yeni bir ex-vivo kültür modelinin tanımlanması amaçlanmıştır. Çalışmamızda oluşturulan deneysel ex-vivo enfeksiyon modelinde, önceden kutanöz leyşmanyazis tanısı almış bir olgudan elde edilen Leishmania tropica promastigot formu kullanılmıştır. Ex-vivo modeli için kullanılacak primer astroglial hücre kültürü, steril koşullar altında, 2-3 günlük yeni doğan Sprague Dawley sıçan beyinlerinden McCarthy yöntemi modifiye edilerek hazırlanmıştır. Yeterli yoğunluğa ulaşan astroglia hücreleri antimona dirençli L.tropica promastigotları ile enfekte edilmiştir. Yirmi dört saatlik inkübasyondan sonra, hücrelerin üzerinde bulunan üst sıvı toplanmış, hücre kültür plağı oda sıcaklığında kurutulduktan sonra metil alkol ile fikse edilmiş ve Giemsa boyası ile boyanarak L.tropica amastigotları tanımlanmıştır. L.tropica promastigotları ile enfekte edilen primer hücre kültürlerinde glia hücreleri içerisinde amastigotlar yoğun bir şekilde gözlenmiştir. Enfekte edilen plaklardan elde edilen sıvı besiyerinin santrifüjü sonrası dip çökeltiden hazırlanan yaymaların Giemsa boyası ile hazırlanan preparatlarında parazitin promastigot formu gözlenmemiştir. Bu çalışmada beş değerlikli antimon tedavisine yanıt alınamayan kutanöz leyşmanyazisli bir hastadan elde edilen promastigotların sıçan glia hücrelerini enfekte ederek amastigot formuna dönüştüğü gösterilmiştir. Oluşturulan bu amastigot glia hücre modeli bildiğimiz kadarıyla L.tropica ile oluşturulan literatürdeki ilk modeldir. Glia hücreleri içerisinde L.tropica amastigot şekillerinin görülmesi Leishmania türlerinin santral sinir sistemini enfekte edebileceğinin göstergesi olarak düşünülmüştür. Tedaviye yanıt alınamayan leyşmanyazis olgularında, santral sinir sistemi Leishmania amastigotlarının immün sistemden kaçması için uygun bir alan olarak gözükmektedir. Bu çalışma, glia hücrelerinin L.tropica amastigotları ile enfeksiyonunu gösteren ilk çalışma olması nedeniyle önem arz etmektedir.

Detay görüntüle