The Development of Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Method for Diagnosis of Viral Hemorrhagic Septicemia (VHS) Disease in Rainbow Trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum)
Makaleler > Tam Makale · 2017
Yazarlar: Uğur DEĞİRMENCİ, Haşmet ÇAĞIRGAN
Journal of Anatolian Environmental and Animal Sciences, Uluslararası, 2017, cilt 2, ss 7-10
DOI: 10.35229/jaes.288116
Özet
VHS, enfekte balık dokusundaki virüsün, duyarlı doku kültürlerinde izolasyonundan sonra ELISA, virüs nötralizasyon, immunofloresans, immunoperoksidazve komplement fiksasyon gibi serolojik testlerle teşhis edilmektedir. ELISA, tekrarlanabilir olması, kullanımının basit olması, çabuk yapılabilmesi veucuz olmasıyla diğer serolojik testlere göre daha çok tercih edilmektedir.Bu çalışmada VHS antijenini tespit edebilecek tavşandan elde edilen sadece bir antikor kullanıldı. Bu antikor biotin ile işaretlenerek testte konjugatolarak kullanıldı. Üretilen antikorun (anti-VHSV F1 ɣ-globulin fraksiyonu) protein konsantrasyonu 28 mg/ml olarak ölçüldü. Mikroplak kuyucukları 10mikrogram/mililitre (μg/ml) anti-VHSV ɣ-globulin fraksiyonu ile kaplandı. Daha sonra şüpheli örnek ilave edildi. Örnekteki VHSV biotinlenmiş anti-VHSV ɣglobulinfraksiyonuna bağlandı. Bu aşamadan sonra ilave edilen horse radish peroksidase (HRP) enzimi ile işaretli avidin, konjugattaki biotin ile bağlandı. Sonolarak tetramethylbenzidine substrat (TMB) eklenmesiyle renk şekillendi ve ELISA okuyucuda 450 nonometrede (nm) okutturuldu. Bu çalışmada geliştirilen ELISAyöntemi ile bilinen tüm VHSV alttipleri (07.71, HE, 23.75) tespit edilebilmektedir. Yine bu yöntem VHSV’ye oldukça spesifiktir ve İnfeksiyöz HematopoetikNekrozis Virüsu (IHNV), Pike Fry rhabdovirus (PFR), Perch rhabdovirus (PR) ve bilinen tüm İnfeksiyöz Pankreatik Nekrozis Virüsu (IPNV) serotipleriyle çaprazreaksiyon vermemektedir. Sonuç olarak geliştirilen bu ELISA yöntemi 80 nanogram (ng) virüs proteinini ve DKID50 değeri 104,75/0,1 ml olan virüsü tespitedebilmektedir.